如何解決蛋白質(zhì)分離純化過程中的蛋白質(zhì)變性問題

 

    蛋白質(zhì)分離純化的方法，要根據(jù)不同的處理物和目的蛋白而選擇不同的方法。所以在純化之前，應該要對目的蛋白一些理化性質(zhì)等要加以了解。不過蛋白質(zhì)純化最常用的是飽和硫酸銨法。本文主要介紹如何解決蛋白質(zhì)分離純化過程中的蛋白質(zhì)變性問題。

　　蛋白質(zhì)變性影響因素：

　　1，一般溫度高于60攝氏度持續(xù)一段時間會變性。不同蛋白耐受高溫不同，具體問題具體分析。

　　2，高濃度有機溶劑，如丙酮，乙醚，巰基乙醇等。

　　3，含有蛋白酶環(huán)境會分解蛋白。

　　4，變性劑，如高濃度鹽酸胍和尿素。

　　5，鹽溶液，在一定濃度鹽作用下，會使蛋白中折疊在內(nèi)部的疏水集團暴露而改變折疊結(jié)構(gòu)。

　　6，pH值變化，強酸強堿條件下會破壞蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。等電點時蛋白質(zhì)沉淀。

　　因此，克服和避開上述內(nèi)容可以減少變性。具體措施：

　　1，控制溫度，pH值。避開強酸強堿和等電點。

　　2，盡量減少和有機溶劑和變性劑的接觸。

　　3，添加蛋白酶抑制劑，可以減少蛋白分解。

　　4，鹽濃度適宜，不能太高。

　　5，增加NMSF，N-馬來酰亞胺，去氧膽酸鈉等抗氧化物質(zhì)，可以防止蛋白被氧化變性。

　　掌握了蛋白質(zhì)變性問題影響因素，避免這些問題，即可有效的防止在蛋白質(zhì)分離純化過程中的蛋白質(zhì)變性。